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国产细胞培养基常见问题及解决方法（二）
日期：2024-04-19 09:54
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摘要：
国产细胞培养基常见问题及解决方法（二）
1.冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入 37°C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。冷冻管由液氮桶中取出解冻时，须注意**，预防冷冻管之爆裂。
2.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除 DMSO？
除少数特别注明对 DMSO 敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有 10-15ml 新鲜培养基之...
国产细胞培养基常见问题及解决方法（二）
1.冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入 37°C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。冷冻管由液氮桶中取出解冻时，须注意**，预防冷冻管之爆裂。
2.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除 DMSO？
除少数特别注明对 DMSO 敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有 10-15ml 新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3.如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200～2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞悬液中加入0.1 毫升的 0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
4.冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一:冷冻管置于 4°C 30-0 分钟→(-20°C30 分钟*)→-80°C16~18 小时(或隔夜)→液氮槽 vaporphase 长期储存。冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降 1-3°C 至–80°C 以下，再放入液氮槽 vaporphase 长期储存。*-20°C 不可超过 1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，存活率稍微降低一些。