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cho-s细胞

  • 产品名称:cho-s细胞
  • 产品型号:cho-s
  • 产品厂商:上海佰晔生物科技中心
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简单介绍
cho-s细胞

cho-s细胞

的详细介绍

 中国仓鼠 卵巢细胞

(CHO-S)
细胞介绍
贴壁生长及悬浮生长均可(用于蛋白表达时,应使用悬浮生长状态,此时细胞生
长状态更好,比表面积更高,生物反应器中的传质、传热效率更高,同时也可提
高生物反应器空间使用效率。工业上大规模生产单抗,重组蛋白,大部分使用悬
浮培养法来生产)
细胞特性
1  来源:中国仓鼠
2  形态 :成纤维细胞样
3  含量:>1x10 6 个/mL
4  污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5  规格:T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
运输和保存 :可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后
立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细
胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一. 培养基 及 培养 冻存 条件准备:
1)培养基信息:EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically
Defined(Sigma-Aldrich,货号:24361C)
添加物:
L- 谷氨酰胺(Sigma-Aldrich,货号:G8540-25G)
Anti-Clumping Agent(Gibco,货号:01-0057AE)
备注 :CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基配制说明书配制,L-谷氨酰
胺配制浓度为 200mM,工作浓度为 8mM(即稀释 25 倍,如 500ml CHO Serum-free
Medium 中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺,抗结团剂使用为 1%,即 500ml CHO
Serum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂)
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37 摄氏度,培养箱
湿度为 70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
二. 细胞 处理 :
传代、转染、建库及实验室规模小试方法:
赛百慷(上海)生物技术股份有限公司提供的 CHO-S 细胞为已驯化的细胞,具有
良好的适应悬浮生长及适应无血清培养基生长特性。
传代方法:
1.10cm 皿中培养:使用计数器(计数器或者血球计数板计数)计数,接种密度
为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提前 37℃预热的新鲜培养基中(建议培养基取 7-8ml,
此时细胞生长状态较好),置于摇床上生长,转速为 120-130rpm,湿度为 70-80%,
5%二氧化碳,温度为 37℃。
2.培养约 2-3 天,细胞密度达到 1×10 6 个活细胞/ml 时,应 1000rpm,25℃离心
5min,离心后计数(此时应稀释),然后接种密度为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提
前 37℃预热的新鲜培养基中。细胞数目足够时,可冻存。
也可选择 125ml 或者 250ml 摇瓶中培养细胞。(注意细胞培养液体积一般在总体
积的五分之一,如在 125ml 摇瓶中加入 25ml 培养物,应注意在摇瓶中培养细胞
时应将瓶盖稍微拧松,以便于气体交换,同时也不宜拧得过松,防止细胞污染)
转染方法:
在连续 5 代细胞密度未超过 2×10 6 个活细胞/ml 时,可以使用 FreeStyle Max 转
染试剂(Gibco,货号:16447)在 CD CHO Serum-free Medium 中直接转染。(注
意:Anti-Clumping Agent 会干扰 FreeStyle Max 转染试剂转染效率,同时也会干扰
其他脂质体型转染试剂的转染效率)
 
建库方法 :
若需要建库,可将细胞接种于 125ml 摇瓶中(接种密度为 3×10 5 个细胞/ml,总
体积为 25ml),此方法同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作。建
库时,需要先建初级库(master bank)(一般为 10 支,每支细胞总数不少于 4.5
×10 7 个细胞),此步骤结束后,从冻存的初级库中取出一支复苏,按照同样步骤
建次级库(working bank)(相同的,一般为 10 支,每支细胞总数不少于 4.5×10 7
个细胞)。
实验室 规模小试方法:
将挑选出的稳定细胞株从 96 孔板到 24 孔板到 6 孔板到 10cm 皿中逐级扩大培养
后(此时需要注意在培养过程中应及时保种,以防止后续步骤出现污染,及应对
可能的表达量衰退现象)以 3×10 5 个细胞/ml 接种于 125ml 摇瓶中,转速为
120-130rpm,温度为 37℃,湿度为 70-80%,连续培养一周,每天取样做出相应
的细胞生长曲线,细胞活率曲线,蛋白表达曲线,可根据实际情况,每天取样测
出培养基中葡萄糖含量,以便决定是否需要补加葡萄糖,同时可使用 CHO Feed
Bioreactor Supplement 作为细胞发酵中补料,同时做出相应的细胞生长曲线,细
胞活率曲线,蛋白表达曲线,为中试放大补料添加做出合理数据支持。
 
注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立
即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注
意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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