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ctla4 ig-24细胞

  • 产品名称:ctla4 ig-24细胞
  • 产品型号:ctla4 ig-24
  • 产品厂商:上海佰晔生物科技中心
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简单介绍
ctla4 ig-24细胞

ctla4 ig-24细胞

的详细介绍

 中国仓鼠卵巢细胞

(CTLA4 Ig-24)
细胞介绍
CHO 细胞以人 CTLA-4 基因细胞外结构域序列和人 IgCgamma1 的绞链区,CH2 和
CH#区序列的融合结构转染,构建了这株细胞。它们表达融合蛋白(CTLA4Ig)。
细胞特性
1) )  来源:中国仓鼠卵巢
2) )  形态 :可贴壁生长(上皮细胞样),也可悬浮生长(圆球形)
3) )  含量:>1x10 6 个/mL
4) )  污染:支原体、**、酵母和**检测为阴性
5) )  规格:T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
运输和保存:使用含有上等胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后,
可在 1000RPM,常温条件下,离心 5min 后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐
使用的培养基后转移至 10cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培养,传代达到细胞生长
状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
 
细胞培养步骤
一. 培养基 及 培养 冻存 条件准备:
培养条件:贴壁生长时,选择 DMEM-H 培养基(DMEM-H:GIBCO,货号 12800017, 添
加 NaHCO3 1.5g/L, 添加 0.2 mM 脯氨酸,0.001 mM 氨甲蝶呤),90%;上等胎牛血
清,10%。
[MTX 是基因 DHFR 产物的抑制物。当培养基中存在 MTX 时,MTX 可渗入细胞内
与 DHFR 蛋白结合,使核苷酸的合成受阻。但是 DHFR 基因连同其附近几千 KB
的 DNA 还会扩增以满足核苷酸合成的需要。理论上 MTX 浓度越大,DHFR 基因
扩增越多,与 DHFR 基因连锁的目的蛋白基因也表达得越多]
悬浮培养时,请使用悬浮生长专用培养基,培养基为:EX-CELL CD-CHO CHO
Serum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,货号:24361C)
 
添加物:
L- 谷氨酰胺(Sigma-Aldrich,货号:G8540-25G)
Anti-Clumping Agent(Gibco,货号:01-0057AE)
备注 :CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基配制说明书配制,L-谷氨酰
胺配制浓度为 200mM,工作浓度为 8mM(即稀释 25 倍,如 500ml CHO Serum-free
Medium 中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺,抗结团剂使用为 1%,即 500ml CHO
Serum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂)
1)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37 摄氏度,培养箱
湿度为 70%-80%。
2)冻存液:90%完全培养基(贴壁生长冻存时)或 90%悬浮培养基(悬浮生长
时),10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞 处理 :
1) 复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加
入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补
加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将
细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检
查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培
养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部
分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止
消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分
钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者
瓶中。
 
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL
培养液后吹匀,将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的
新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细
胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃
去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约 1ml 含血清的培养基后
加入冻存管中,再添加 10%DMSO 后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞
收集,1000RPM 条件下离心 4 分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加
入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入 10%DMSO 后进行冻
存。
注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立
即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注
意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃。
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