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hk-2细胞

  • 产品名称:hk-2细胞
  • 产品型号:hk-2
  • 产品厂商:上海佰晔生物科技中心
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简单介绍
hk-2细胞

hk-2细胞

的详细介绍

 人肾皮质近曲小管上皮细胞

(HK-2)
细胞介绍
该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞,通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生 化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生 包装细胞Psi-2,Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317,*后 将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7 中含有新霉素抗性,但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2 细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。
细胞特性
1)来源:正常肾
2)形态:上皮细胞样
3)含量:>lxl06 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备:
1. 准备角化培养基(Defined K-SFM,货号:10785-012);角化因子(500X);添 力口 5ng/mLEGF;双抗 1%。
2. 培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理:
1.复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入l〇cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检 查细胞密度。
2.细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37°C培
养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部 分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。
按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分 钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;
细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,细 胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至*终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混匀,按每lml的数量分配到冻存管中,注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液 氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
注意事项:
收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立 即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注 意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细 胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
 
 
 
 
 
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